东谈主源肝癌细胞HepG2细胞脂质千里积模子的配置过甚脂质代谢磋商
中国中医药信息杂志/2025年
1. 弁言
2型糖尿病（type2diabetesmellitus，T2DM）所以血糖升高为特色的代谢性疾病，其并发症可累及全身多个靶器官功能阻扰，已成为独揽东谈主类健康的要紧疾病之一。非乙醇性脂肪性肝病（nonalcohol fatty liver disease，NAFLD）是T2DM临床常见慢性同一症，所以三酰甘油（TG）为主的脂质在肝细胞内过度千里积酿成脂质液滴为特色。磋商发现，T2DM患者同一NAFLD发生率跨越60%，且该部分患者亏蚀风险显贵升高，可能与NAFLD加重脂质代谢芜乱，增多心血管疾病风险联系。
青钱柳是我国私有树种和可贵中药资源，磋商标明，青钱柳有转机血脂作用，但具体机制尚未倡导。胆固醇转机元件结合卵白-1（SREBP-1）能通过调控脂肪酸合成酶（FAS）等瑕疵酶影响脂质稳态，被以为是调节NAFLD的潜在靶点。
课题组前期通过汇集药理学掂量发现，青钱柳可能通过调控PI3K/Akt信号通路调节T2DM同一NAFLD。本磋商采选棕榈酸钠指令HepG2细胞配置脂质千里积模子，探讨青钱柳改善脂质代谢芜乱的作用机制，为临床调节T2DM同一NAFLD提供执行依据。
张开剩余86%2.执行材料
本文华纳棕榈酸（钠）当作高脂细胞添加剂（货号KC002，Xi'an Kunchuang Technology, 西安鲲创科技）当作游离脂肪酸（free fatty acids，FFAs）完成体外细胞执行。采选可靠的高脂细胞添加剂，简略保证溶剂无毒、无菌、常温无析出、低温无析出、浓度精确，无需屡次加热助溶，显贵减少操作法子，栽培执行的走漏性。本色使用时，只需要将高脂细胞添加剂按照比例加入到皆备培养基中即可。
(数据起首 http://www.xakckj.com.cn/)
3.执行标准
1）细胞培养及活力测定
HepG2细胞用DMEM高糖皆备培养基（含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素），活着俗培养箱（37℃、95%空气、5% CO2）培养，隔日换液，待细胞和会度达到85%时，使用0.25%胰酶消化并传代。将处于对数孕育期的HepG2细胞以5×103个/孔接种于96孔板中，每孔100μL，待细胞孕育至70%～80%和会时，弃去培养基，加入含不同浓度（2000、1000、500、250、100μg/mL）青钱柳水提液冻干粉的皆备培养基，空缺组不接种细胞，对照组加入不含药物培养基，每组5个复孔，分辨于培养12、24h后加入CCK-8溶液10μL，培养箱避光孵育1h，酶标仪波长450nm检测各孔吸光度（OD值），筹画细胞活力。
2）模子配置与分组
采选棕榈酸钠指令 HepG2细胞模拟T2DM同一NAFLD体外模子。HepG2 细胞以5×105个/mL接种在6孔板中，每孔2 mL，待细胞贴壁后，加入棕榈酸钠（150、250、350 μmol/L）， 分辨于培养24、48 h后荒谬显微镜下拍照不雅察，结合细胞内TG含量检测效用筛选造模浓度实时候。
凭证CCK-8检测效用细目青钱柳低、中、高纷扰剂量，将细胞分为空缺组、模子组（350μmol/L棕榈酸钠）、吡格列酮组（350μmol/L棕榈酸钠+3.92mg/L吡格列酮）、青钱柳低剂量组（350μmol/L棕榈酸钠+100μg/mL青钱柳冻干粉）、青钱柳中剂量组（350μmol/L棕榈酸钠+250μg/mL青钱柳冻干粉）、青钱柳高剂量组（350μmol/L棕榈酸钠+500μg/mL青钱柳冻干粉），每组5个复孔，先加入棕榈酸钠造模，再分辨予相应浓度药物科罚。
随后，进行尼罗红染色、BODIPY493/503荧光探针染色、ELISA检测、Western blot检测、qPCR检测等，谛视法子请参考原文。
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4.部分执行效用
1）细胞口头学不雅察
DMEM高糖培养基培养12h后，可见多数HepG2细胞贴壁孕育，呈上皮样口头，迪士尼彩乐园安全吗边际明晰可见，细胞散在散布、尚未成团；培养24h后，部分细胞初始抱团孕育；培养48h后，部分细胞重叠成小岛状，见图1。
2）造模条款筛选效用
150、250、350μmol/L棕榈酸钠纷扰HepG2细胞24h后细胞均贴壁孕育，未见显著荡漾物及空泡细胞，口头无超过变化；48h后细胞孕育气象较差，口头皱缩，可见显著细胞碎屑。
150、250、350μmol/L棕榈酸钠纷扰HepG2细胞24h后检测细胞内TG含量，效用浮现，150μmol/L棕榈酸钠组细胞TG含量与对照组各异无统计学真义（P>0.05），250、350μmol/L棕榈酸钠组细胞TG含量较对照组显贵增多（P<0.01），350μmol/L棕榈酸钠组较250μmol/L棕榈酸钠组TG含量显贵增多（P<0.01）；纷扰48h后，150μmol/L棕榈酸钠组细胞TG含量较对照组显贵增多（P<0.01），250、350μmol/L棕榈酸钠组较150μmol/LPA组TG含量显贵下跌（P<0.01）。故选用350μmol/L棕榈酸钠指令HepG2细胞24h造模。
3）青钱柳对HepG2细胞活力的影响
使用不同浓度青钱柳纷扰细胞12、24h，效用浮现，纷扰12h后，与模子组相比，青钱柳100、250、500μg/mL细胞活力各异无统计学真义（P>0.05），青钱柳1000、2000μg/mL纷扰后细胞活力显贵下跌（P<0.01）；纷扰24h后，与模子组相比，青钱柳100μg/mL细胞活力各异无统计真义（P>0.05），其余4组细胞活力均显贵缩短（P<0.01）。故后续执行聘请100、250、500μg/mL当作青钱柳低、中、高剂量，纷扰12h进行关联检测。见表3。
4）青钱柳对模子细胞脂质千里积的影响
尼罗红染色效用浮现，空缺组HepG2细胞脂质堆积较少；模子组HepG2细胞出现多半脂质堆积；吡格列酮组和青钱柳低、中、高剂量组细胞脂质千里积较模子组有不同经过改善。见图2。BODIPY493/503荧光探针效用与尼罗红染色趋势一致，见图3。
随后，还测试了青钱柳对模子细胞上清液炎症因子含量的影响、青钱柳对模子细胞 PI3K/Akt/SREBP-1/FAS 通路 及Bax、Bcl-2卵白抒发的影响、青钱柳对模子细胞脂肪甘油三酯酶、CD36mRNA抒发的影响等，谛视效用请参考原文。
5.商讨
甘油三酯（TG）由甘油和脂肪酸构成，其在肝脏的超过千里积被以为是NAFLD的瑕疵特征之一。棕榈酸是游离脂肪酸的迫切构成部分，可通过上调CD36卵白抒发指令肝脏TG累积，从而促进NAFLD发生。棕榈酸钠是棕榈酸的钠盐，对细胞脂肪生成和脂肪变性均有促进作用，常用于构建细胞模子。东谈主源肝癌细胞株HepG2系一种表型与肝细胞极为雷同的肝胚胎瘤细胞株，适用于肝细胞代谢方面的磋商。因此，本磋商使用350μmol/L棕榈酸钠指令HepG2细胞脂质千里积，效用标明模子组细胞TG含量相较于平时细胞显贵增多。
执行效用标明青钱柳冻干粉纷扰后可显贵改善模子细胞脂质千里积，其机制可能与缩短p-PI3K、p-Akt、SREBP-1、FAS卵白抒发水平，下调CD36mRNA并上调ATGLmRNA抒发水平关联，领导青钱柳可能通过调控PI3K/Akt/ SREBP-1/ FAS信号通路改善脂质千里积，可能与促进TG领悟、减少TG合成关联。此外，青钱柳冻干粉纷扰可显贵缩短细胞上清液TNF-α和IL-6含量，显贵下调模子细胞Bax卵白抒发，上调Bcl-2卵白抒发，领导青钱柳可缩小PA指令的HepG2细胞脂毒性水平，抗肝细胞凋一火。
小编有话说：
HepG2细胞脂质千里积与代谢芜乱改善是当今的磋商热门，绝大数手艺东谈主员深广采选的是500μmol/L棕榈酸（钠）勾通250μmol/L油酸（钠）作用48至72小时的手艺有贪图指令HepG2细胞以配置NAFLD体外细胞模子，部分手艺东谈主员也会单独采选棕榈酸（钠）或油酸（钠）进行指令，由于HepG2细胞自身较为明锐，部分情况下也能出现理思的执行效用，但总体来说，棕榈酸（钠）的中枢作用是指令细胞损害和炎症，油酸（钠）的中枢作用是指令细胞脂质千里积，因此，在磋商非乙醇性脂肪性肝病时，更提出采选棕榈酸（钠）勾通油酸（钠）的手艺有贪图，使执行条款更相宜东谈主体环境且执行效用更为可靠。
参考文件
刘艺璇、吴昊洋等. 青钱柳对棕榈酸钠指令的HepG2细胞脂质千里积的影响及作用机制[J], 中国中医药信息杂志迪士尼彩乐园2下载,2025.
发布于：陕西省